Hur bestämmer man den optimala koncentrationen?
För induceraren IPTG (isopropyl-beta-d-tiogalaktosid), ju högre koncentration desto bättre.Den optimala koncentrationen beror på de specifika experimentella förhållandena och den önskade induktionseffekten.
I allmänhet används koncentrationen av IPTG i intervallet 0,1-1 mM.Lägre koncentrationer kan minska negativa effekter på celltillväxt och kan minska cytotoxicitet på grund av överuttryck av målproteiner.Högre koncentrationer kan orsaka överdriven cellmetabolisk börda, vilket påverkar celltillväxt och expressionseffektivitet.
Sättet att bestämma den optimala koncentrationen kan vara att utvärdera uttrycksnivån för målproteinet genom att utföra IPTG-induktionstester vid olika koncentrationer.Småskaliga odlingstester kan utföras med användning av en rad IPTG-koncentrationer (t.ex. 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, etc.) och expressionseffekten vid olika koncentrationer kan utvärderas genom att detektera expressionsnivån för målproteinet (t.ex. Western blot eller fluorescensdetektion).Enligt de experimentella resultaten valdes koncentrationen med bäst uttryckseffekt som optimal koncentration.
Dessutom kan du också hänvisa till relevant litteratur eller erfarenheter från andra laboratorier för att förstå det vanliga IPTG-koncentrationsintervallet under liknande experimentella förhållanden, och sedan optimera och justera efter de experimentella behoven.
Det är viktigt att notera att den optimala koncentrationen kan variera beroende på olika uttryckssystem, målproteiner och experimentella förhållanden, så det är bäst att optimera från fall till fall.
Posttid: 2023-09-28