4-Nitrofenyl beta-D-galaktopyranosid CAS:200422-18-0

Effekt: ONPG är ett substrat som specifikt används för att detektera närvaron och aktiviteten av enzymet β-galaktosidas.När β-galaktosidasenzym är närvarande och aktivt klyver det ONPG till två produkter: o-nitrofenol och ett galaktosderivat.Frigörandet av o-nitrofenol resulterar i en gul färgförändring, som kan mätas med en spektrofotometer.

Tillämpning: ONPG har flera tillämpningar inom molekylärbiologi och biokemiforskning:

Bestämning av β-galaktosidasaktivitet: ONPG används vanligtvis för att mäta och kvantifiera aktiviteten av β-galaktosidasenzym.Hastigheten för o-nitrofenolbildning, som är direkt proportionell mot enzymaktiviteten, kan mätas spektrofotometriskt.

Genuttryck och reglering: ONPG används ofta i experiment relaterade till studier av genuttryck och reglering.Det används ofta i fusionsproteinanalyser, såsom det vanligt använda lacZ-fusionssystemet, för att studera uttrycket av gener under kontroll av specifika promotorer.Beta-galaktosidasaktiviteten mätt med ONPG ger insikter i nivån på genuttryck.

Screening för β-galaktosidasaktivitet: ONPG kan användas som en kolorimetrisk screeningsmetod i rekombinant DNA-teknik för att identifiera närvaron och funktionaliteten av LacZ-genen, som kodar för β-galaktosidas.Denna screeningsmetod hjälper till att identifiera kloner som innehåller genen av intresse.

Enzymkinetikstudier: ONPG är också användbar för att studera kinetiken för β-galaktosidasenzym.Genom att mäta hastigheten för enzym-substratreaktion vid olika substratkoncentrationer är det möjligt att bestämma kinetiska parametrar som Michaelis-Menten-konstanter (Km) och maximala reaktionshastigheter (Vmax).