4-nitrofenyl beta-D-galaktopyranosid CAS: 200422-18-0

Effekt: ONPG är ett substrat som specifikt används för att detektera närvaron och aktiviteten hos enzymet β-galaktosidas. När β-galaktosidasenzymet är närvarande och aktivt klyver det ONPG i två produkter: o-nitrofenol och ett galaktosderivat. Frisättningen av o-nitrofenol resulterar i en gul färgförändring, vilket kan mätas med en spektrofotometer.

Tillämpning: ONPG har flera tillämpningar inom molekylärbiologisk och biokemisk forskning:

Bestämning av β-galaktosidasaktivitet: ONPG används ofta för att mäta och kvantifiera aktiviteten hos β-galaktosidasenzymet. Hastigheten för bildning av o-nitrofenol, som är direkt proportionell mot enzymaktiviteten, kan mätas spektrofotometriskt.

Genuttryck och reglering: ONPG används ofta i experiment relaterade till genuttryck och regleringsstudier. Det används ofta i fusionsproteinanalyser, såsom det vanligt förekommande lacZ-fusionssystemet, för att studera uttrycket av gener under kontroll av specifika promotorer. Beta-galaktosidasaktiviteten mätt med ONPG ger insikter i nivån av genuttryck.

Screening för β-galaktosidasaktivitet: ONPG kan användas som en kolorimetrisk screeningmetod inom rekombinant DNA-teknik för att identifiera närvaron och funktionaliteten hos LacZ-genen, som kodar för β-galaktosidas. Denna screeningmetod hjälper till att identifiera kloner som innehåller den aktuella genen.

Studier av enzymkinetik: ONPG är också användbart för att studera kinetiken hos enzymet β-galaktosidas. Genom att mäta hastigheten för enzym-substratreaktion vid olika substratkoncentrationer är det möjligt att bestämma kinetiska parametrar såsom Michaelis-Menten-konstanter (Km) och maximala reaktionshastigheter (Vmax).